In questa esperienza determiniamo la concentrazione di etanolo presenti nei nostri lieviti,Il principio del metodo che abbiamo utilizzato, è di ossidare tutto l'etanolo presente ad acetaldeide con nicotamide-adenina dinucleotide (NAD). La reazione viene catalizzata da alcool deidrogenasi.
L'acetaldeide viene ossidata in fine ad acido acetico in presenza di aldeide deidrogenasi.
questa esperienza è stata fatta con reagenti già preparati, il pacchetto formato da:
- bottiglia da 100 ml di soluzione contenente tampone fosfato a pH 9
- 30 compresse che contengono 4 mg di NAD e 08 U di aldeide deidrogenasi
- bottiglia che contiene 1,6 ml di sospensione id alcool deidrogenasi
Preparazione dei reagenti.
usare il contenuto della prima bottiglia non diluito, sciogliere (in una provetta) una compressa di NAD in 3 ml della soluzione della prima bottiglia. preparare 1 provetta per ogni prova.
| Bianco | Standard | Campione | |
| Miscela di reazione 2 | 3,000 μl | 3,000 μl | 3,000 μl |
| Acqua distillata | 0,100 μl | ˗ | ˗ |
| Campione | ˗ | ˗ | 0,100 μl |
| Sol. Std di etanolo 0,058 g/l |
˗ | 0,100 μl | ˗ |
Agitare, dopo 3 min. leggere assorbimento a 340 nm e agg. |
|||
Sospensione |
0,050 μl | 0,050 μl | 0,050 μl |
Dopo circa 10 minuti la reazione è completamente avvenuta si legge l'assorbanza. Per far si che la nostra lettura sia accurata il campione non deve contenere più di 0,060 g/l di etanolo, se supera questa concentrazione bisogna diluirlo.
Per concludere l'esperienza abbiamo calcolato la concentrazione nello standard e nel campione.
Autori: Roberta e Sara
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