Eccoci qua con un'altra esperienza di laboratorio!
Questa volta abbiamo determinato la concentrazione di un campione
usando lo spettrofotometro.
PROCEDURA:
Mettere 8 provette in fila, prendere 1ml di una soluzione madre di Albumina e metterla nella prima provetta.
Prelevare 0,5ml dalla prima provetta e metterli nella seconda, aggiungere alla seconda provetta 0,5ml di H2O distillata e mescolare. Prelevare 0,5ml dalla seconda provetta e metterli nella terza, agg. 0,5ml di H2O distillata e mescolare. Continuare con queste diluizioni fino all’ultima provetta.
Prendere 8 nuove provette, prelevare 0.1ml da ogni provetta precedente e porli nelle nuove. Ad ognuna di queste agg. 1ml di Blu di Coomassie, preparare anche una provetta con 0,1ml di H2O distillata e 1ml di Blu di Coomassie (sarà il nostro “Bianco”) e un’altra provetta con 0,1ml del campione e 1ml di Blu di Coomassie.
Il Blu di Coomassie si lega alla proteina e determina uno spostamento del massimo di assorbimento del colorante. L'assorbimento ottico della soluzione è misurato a una lunghezza d'onda di 595 nm.
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| Le provette con il Coomassie |
Porre le provette nello spettrofotometro e registrare la curva
standard. Porre il campione e, in base all’Assorbanza registrata determinare la
concentrazione.
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