DOSAGGIO PROTEINE - METODO BRADFORD

Eccoci qua con un'altra esperienza di laboratorio!

Questa volta abbiamo determinato la concentrazione di un campione usando lo spettrofotometro.

PROCEDURA:

Mettere 8 provette in fila, prendere 1ml di una soluzione madre di Albumina e metterla nella prima provetta.

Prelevare 0,5ml dalla prima provetta e metterli nella seconda, aggiungere alla seconda provetta 0,5ml di H₂O distillata e mescolare. Prelevare 0,5ml dalla seconda provetta e metterli nella terza, agg. 0,5ml di H₂O distillata e mescolare. Continuare con queste diluizioni fino all’ultima provetta.

Prendere 8 nuove provette, prelevare 0.1ml da ogni provetta precedente e porli nelle nuove. Ad ognuna di queste agg. 1ml di Blu di Coomassie, preparare anche una provetta con 0,1ml di H₂O distillata e 1ml di Blu di Coomassie (sarà il nostro “Bianco”) e un’altra provetta con 0,1ml del campione e 1ml di Blu di Coomassie.

Il Blu di Coomassie si lega alla proteina e determina uno spostamento del massimo di assorbimento del colorante. L'assorbimento ottico della soluzione è misurato a una lunghezza d'onda di 595 nm.

Le provette con il Coomassie

Porre le provette nello spettrofotometro e registrare la curva standard. Porre il campione e, in base all’Assorbanza registrata determinare la concentrazione.

Le provette prima dell'aggiunta del Coomassie

Maria Emilia, la nostra tutor!

Esempio di curva standar

Autori: Roberta e Sara

PREPARATI ISTOLOGICI

Ed eccoci qua con la seconda esperienza di laboratorio!

La Prof ci ha portato i Preparati Istologici già fissati sui vetrini, noi li abbiamo reidratati e colorati.

Eccoci a lavoro!!!

 

Prendiamo appunti!

Chi se li ricorda i nomi di tutte le sostanze aggiunte sennò?!




PROCEDURA:

"Mi raccomando, non toccate i tessuti!!!"

Mettere la sezione di tessuto in una capsula Petri, agg. H2O fino a coprirla, togliere l'H2O aspirandola con la pipetta, agg. una soluzione di Idrato acido fosfonolidico (si lega alle molecole di collagene). Aspettare 2min., toglierlo aspirando. Agg. H2O sempre coprendo tutto il tessuto, toglierla aspirando. Agg. il colorante Picrosirius red sul tessuto. Aspettare un'ora. Aspirarlo, agg. Alcol etilico, aspirarlo, far asciugare. Mettere lo Xilene (per togliere le bolle d'aria). Mettere il vetrino di copertura.

Aspettare un giorno.

Ecco un vetrino pronto per essere esaminato!

...

No, aspettate, dobbiamo attendere un giorno prima di poterli guardare al microscopio...

Rene

Alla lezione successiva ognuno di noi ha scoperto che tipo di tessuto aveva colorato.

Ecco alcuni tessuti visti al microscopio:

Autori: Roberta

Tessuto cardiaco

Rene

Grasso addominale

Muscolo cardiaco

Pancreas

Parete aortica

Sinovia

Stomaco

Cartilagine del ginocchio

Cervello

Ghiandola salivare

STRISCIO DI SANGUE SU VETRINO

La prima esperienza di laboratoio è ststa fantastica!
Abbiamo fatto lo Striscio di Sangue!


Ognuno di noi ha fatto lo striscio di sangue sul vetrino e l'ha colorato.


PROCEDURA:
Mettere una gocciolina di sangue quasi in fondo ad uno dei lati corti del vetrino, prendere un altro vetrino e metterlo sopra alla gocciolina con un'inclinazione di 45° c.a., far aderire la gocciolina di sangue da lato a lato del vetrino sovrastante, dopodichè strisciare verso il lato opposto.
Aspettare che asciughi.
Fare 5 immersioni in etanolo, 5 immersioni in Ematossilina (colorante), 5 immersioni in Eosina (colorante).
Far scorrere sopra H2O distillata con una pipetta Pasteur, in questo modo togliamo il plasma e l'eccesso di colorante. Far asciugare.

Direi che come prima volta non è venuto male!

Basta un semplice microscopio ottico per vedere cosa si nasconde dentro a questo fluido. Conosciamo tutti i globuli rossi, i globuli bianchi e le piastrine ma quanti di noi li hanno visti al microscopio? 

INIZIA LA CACCIA!

Che meraviglia!

Di globuli rossi ce ne sono una marea, ma i globuli bianchi sono quelli, senza dubbio, più affascinanti, hanno una morfologia varia e per questo abbiamo fatto a gara a riconoscerli e a chi trovava quello più "strano"!

Autori: Roberta

OGGI E' NATA UNA STELLA

Oggi è nata una stella nel firmamento formativo senese, un corso professionalizzante che prepara 20 studenti ad affrontare un percorso di studi che li porterà alla fine di due anni ad essere esperti nel controllo di qualità delle aziende farmaceutiche.

Masini M.